PCR analiza: što je to? Kako da se PCR analizu

Ne tako davno razvio pouzdanu, vrlo osjetljive i brza metoda za dijagnosticiranje raznih zaraznih bolesti kod ljudi. Takav postupak naziva se „PCR”. Što je to, što je njegova suština, ono što on može identificirati mikroorganizme i kako ga uzimati, mi ćemo opisati u ovom članku.

Povijest otkrića

Izumio lančana reakcija polimeraze (PCR) je američki znanstvenik Keri Myullis u 1983. U početku je patentirana metoda dijagnoze od strane „Cetus Corporation”, u kojem je radio i njegov kreator. No, 1992. sva prava i patenti su prodane tvrtke „Hoffman-La Roche”. Nakon toga, ispostavilo se da je slična istraživanja provedena su paralelno i su iskazane po drugi američki biolozi, kao što je Elis Chen, David Edgar, Ivan rre. Godine 1980. sudjelovali u ovom pitanju i Sovjetski znanstvenici A. Slyusarenko A. Kaledin i S. Gorodeckog. Stoga, kako bi se utvrdilo je jedini vlasnik autorskih prava nije bilo moguće. Mnoge izvrsne biokemičara su doprinijeli razvoju metoda reakcije polimeraze i CERN patentirao svoje inovacije. U ovom trenutku analize PCR se provodi kroz posebno opremljenim laboratorijima.

Suština metode PCR dijagnostiku

PCR analiza: što je to i kako se to radi? Suština metode je u tome da se pomoću posebnog enzima DNA polimeraze in vitro za povećanje volumena određenom mikroba okruženju. Da biste to učinili više puta višestruko dostupna DNK materijal. Dakle, prisutnost patogena u uzorku iznos povećat će se na trošak biokemijski laboratorij manipulacija i bakterije neće biti teško otkriti u mikroskop.

Kako je proučavanje materijala?

Za provođenje analize potrebne:

• DNA predložak;
• početnice, povezivanje s kraja na kraj fragment materijala;
• Termostabilna enzim DNA polimeraza;
• kemikalije, osigurali pravilan rad enzima;
• pufer otopina je potrebno stvoriti odgovarajuće uvjete za rast i razvoj DNK materijala.

Za izvođenje PCR djeluju 25-30 ponavljanja koja se sastoji od tri koraka: denaturiranje, žarenje i istezanja.

Za analizu polimezarnoy lančana reakcija pomoću posebnog uređaja - biciklista. Suvremena oprema omogućuje instaliranje potrebne za grijanje i hlađenje cijevi program eliminirati pogreške prilikom dijagnoze.

Gdje se prijaviti dijagnozu?

Postupak Polimezarnoy lančana reakcija se koristi u različitim područjima medicine:

• Forenzička ga koristiti za identifikaciju genetskog materijala, kao što su sušilo, slina i krv
• PCR analiza krvi pomaže genotipizaciju npr za otkrivanje genetskih pojedinog zasađene odgovor određenog lijeka;
• metodom postavljena obiteljskim vezama između ljudi;
• najtraženiji PCR postupak je postao u medicinskoj dijagnostici za određivanje različitih infektivnih bolesti.

Što infekcija otkriva PCR?

Dakle, medicina je odavno uspješno koristi PCR analiza. Što je, već smo naučili. A neki uzročnici mogu otkriti s njim? PCR nakon dijagnosticiranih zaraznih bolesti :

• hepatitis A, B, C;
• ureaplasmosis;
• kandidijaza;
• klamidija;
• mikoplazmoza;
• bakterijska vaginoza;
• zarazna mononukleoza;
• trihomonijazu;
• HPV infekcija;
• tuberkuloze;
• herpes infekcije od 1. i 2. vrste;
• Helicobacter pylori infekcije;
• citomegalovirus;
• difterije;
• salmoneloze;
• HIV infekcija.

Također, PCR metode se koriste u dijagnostici raka.

Prednosti postupka

Dijagnostika PCR ima nekoliko prednosti:

1. Visoka osjetljivost. Čak i sa samo nekoliko DNK molekule mikroorganizam PCR analizom utvrdi prisutnost infekcije. To pomaže postupak kroničnih i latentne bolesti koje. Često se u takvim slučajevima, mikroorganizam je neobrađeno i na druge načine.
2. Kako bi se istražila bilo kojeg prikladnog materijala, kao što je krv, slinu, seksualne selekcije, kose, epitelnim stanicama. Najčešći je test krvi i urogenitalnog bris PCR.

3. To ne zahtijeva dugo uzgoj usjeva. Automatizirani proces dijagnostika omogućava dobivanje rezultata iz studija nakon 4-5 sati.
4. Metoda je gotovo u potpunosti autentičan. Snimljeno je samo izolirani slučajevi lažno negativnih rezultata.
5. Sposobnost prepoznavanja nekoliko vrsta patogena u jedan uzorak materijala. To ne samo da ubrzava proces dijagnoza bolesti, ali i značajno smanjuje troškove materijala. Često, liječnik propisuje sveobuhvatnu analizu PCR. Cijena anketa, koji se sastoji od određivanja šest patogena, je oko 1500 rubalja.

Preporuke za pripremu za analizu

Rezultati važiti PCR studije trebaju biti testirani, slijedeći preporuke iz preliminarnih priprema za dijagnozu:

1. Prije dostavljanja sline trebao suzdržati od jedenja i lijek za 4 sata prije uzorkovanja materijala. Neposredno prije postupka, isprati usta s prokuhanu vodu.
2. Navedene pravila moraju biti vođeni i prilikom uzimanja uzorka s unutarnje strane obraza. Nakon ispiranja preporuča se provoditi lagane masaže na koži za oslobađanje prostate sekreta.
3. Urin je obično prikupljaju kod kuće. Da biste to učinili, morate provesti temeljitu WC u genitalije. U sterilnom plastičnom spremniku se prikupe 50-60 ml urina. Ona preporuča za žene umetnuti tampon u rodnicu, a ljudi koliko je god moguće povući kožu puta kako bi se osigurala čistoća materijala. Ne možete uzeti materijal za vrijeme menstruacije.
4. Za isporuku sperme da se suzdrže od spolnog odnosa tijekom 3 dana prije uzimanja materijala. Također, liječnici su savjetovali da napusti korištenje saune i tople kupke, alkohola i začinjene hrane. 3 sata prije analize je potrebno da se suzdrže od mokrenja.
5. Proći urogenitalnog razmaz, na primjer, ako je analizu na klamidija PCR, i žene i muškarci se preporučuje da se seksualna odmor za tri dana. 2 tjedna prije analize ne mogu uzeti antibiotike. Za tjedan dana morate prestati koristiti intimne gelove, masti, vaginalni čepići, ispiranje. 3 sata prije studiji trebali suzdržati od mokrenja. Tijekom menstruacija ograda materijal se ne provodi, samo tri dana nakon prestanka uočavanje može uzeti urogenitalnog mrlja.

PCR u trudnoći

Razdoblje čekanja za bebe, mnoge zarazne bolesti, spolno prenosive bolesti, su krajnje opasni za normalan razvoj fetusa. Spolno prenosive bolesti mogu potaknuti intrauterinog razvoja, pobačaj ili prijevremeni porod, prirođene malformacije djeteta. Dakle, važno je da se u ranoj trudnoći screening PCR. Pass analiza neophodna pri registraciji - do 12 tjedana.

Ograda materijal dolazi iz cervikalnog kanala s posebnim četkama. Postupak je bezbolan i ne predstavlja opasnost za bebu. Normalno vrijeme trudnoće analiziranog za klamidija PCR metode, kao i ureaplasmosis, mikoplazmoza, citomegalovirus, herpes, papiloma virusa. Takav pregled kompleks zvan per 6.

PCR za dijagnozu HIV

S obzirom na činjenicu da je metoda lančane reakcije polimeraze je vrlo osjetljiv na promjene u tijelu i uvjetima dijagnoza, mnogi faktori mogu utjecati na ishod. Stoga PCR analiza za infekciju HIV-om nije pouzdana metoda, njegova učinkovitost - 96-98%. Preostalih 2-4% od testa daje lažno pozitivne rezultate.

No, u nekim situacijama, bez PCR dijagnostiku HIV-a ne može učiniti. Obično se provodi za osobe s lažnim negativnih ELISA. Ovi podaci pokazuju da je osoba još nije razvila antitijela na virus i ne može se otkriti bez povećanja broja višestrukih. Da se to može postići obavljanje krvnog testa PCR metoda.

Isto tako potrebno je dijagnoza djece prve godine života, rođen HIV-pozitivnih majki. Metoda je jedini način da se pouzdano utvrditi status djeteta.

PCR za dijagnoza hepatitisa

Lančana reakcija polimeraze metoda omogućuje otkrivanje DNK virus hepatitisa A, B, C, i prije nego formiranje antitijela na infekciju ili simptom napadaj. Posebno učinkovita je PCR na hepatitis C, budući da 85% takvih bolesti su asimptomatske i bez pravovremeno liječenje postaje kronična.

Pravovremeno otkrivanje patogena će pomoći da se izbjegne komplikacije i dugotrajno liječenje.

PCR integrirani probir

Sveobuhvatna PCR analiza: što je to? Ova reakcija lanca postupak polimezarnoy istraživanje koje uključuje definiranje više vrsta infekcije Mycoplasma: genitalium djelovima, Mycoplasma hominis, Gardnerella vaginalis, Candida, Trichomonas, citomegalovirus, ureaplasmas urealitikum, herpes 1 i tipa 2, gonoreja, ljudskim papiloma virusom. Cijena ove dijagnoze u rasponu od 2000 do 3500 rubalja. ovisno o klinici, materijala i opreme, kao i o vrsti analize: kvalitativno ili kvantitativno. Ono što je potrebno u vašem slučaju - liječnik odluči. U nekim slučajevima, jednostavno otkrivanje prisutnosti patogena u drugima, kao što je HIV, važnu ulogu kvantitativnim testom. naziva „PCR analiza 12” u dijagnostici svih gore patogena ispitivanja.

Dešifriranju rezultate analize

Transkripcija PCR analiza je jednostavno. Postoje samo dvije indeks skale - „pozitivne” i „negativne”. Nakon otkrivanja uzročnika limenka liječnici s 99% pouzdanosti th potvrditi prisustvo bolesti i započeti liječenje pacijenta. U kvantitativna metoda određivanja infekcije u odgovarajući stupac indeks broj otkrivenih bakterija će biti naveden. Samo liječnik može utvrditi opseg bolest i propisati potrebno liječenje.

U nekim slučajevima, primjerice u određivanju HIV infekcije pomoću PCR, s negativnim rezultatom, postoji potreba za dodatnim istraživanjima kako bi potvrdili ove brojke.

Gdje se testirati?

Gdje prođe-PCR analize u javnom kliniku ili privatnom laboratoriju? Nažalost, u općinsko medicinske ustanove oprema i metode su često zastarjeli. Stoga je bolje dati prednost privatnim laboratorijima s modernom opremom i visoko kvalificirano osoblje. Osim toga, u privatnoj klinici ne dobijete rezultate puno brže.

U Moskvi, mnogi privatni laboratoriji nude PCR analize za različite infekcije. Na primjer, u takav klinike kao „Vita”, „Integrirani klinika”, „Sretna obitelj”, „Uro-Pro”, provodi PCR analiza. Cijena Anketa je 200 rubalja. za određivanje patogen.

Može se zaključiti da je dijagnoza zarazne bolesti PCR u većini slučajeva je brz i pouzdan način za otkrivanje patogena u tijelu u ranim fazama infekcije. Ipak, u nekim slučajevima, odabrati druge metode dijagnoze. Odrediti potrebu za takvom istraživanju može biti samo stručnjak. PCR analiza Dešifriranje zahtijeva profesionalni pristup. Slijedite liječničke savjete i ne daju vlastite testove, koji nisu potrebni.